BioximiaForYou

amilaza

Alfa-amilaza (diastaza, alfa-1,4-glukan-4-glukanohidrolaza) spada u klasu hidrolaza koja katalizira hidrolizu polisaharida, uključujući škrob i glikogen, u dekstrine i jednostavne di- i monosaharide (maltozu, glukozu).

Amilaza u najvećoj koncentraciji je u gušterači i žlijezdama slinovnica, odnosno u obliku izoenzima pankreasa i salive. U fiziološkim uvjetima, serumska amilaza se sastoji od 40% amilaze pankreasa i 60% salivarne amilaze. Koristeći specifične inhibitore ili razdvajanje elektroforezom, moguće je utvrditi podrijetlo enzima prisutnog u plazmi. Amilaza se uklanja iz plazme putem bubrega i izlučuje se urinom. To dovodi do većeg sadržaja informacija koji određuje aktivnost alfa-amilaze u urinu kao test koji procjenjuje funkcionalno stanje gušterače. Rast aktivnosti amilaze je od najveće važnosti u dijagnostici bolesti gušterače.

Klinička i dijagnostička vrijednost:

Aktivnost alfa-amilaze u krvi i urina uvelike varira tijekom dana.

Hiperamalasemija - povećanje aktivnosti amilaze u krvnom serumu.

Ø Akutni pankreatitis - maksimalne vrijednosti javljaju se u prvih 6 do 12 sati nakon pojave simptoma bolesti. Nakon tog vremena aktivnost enzima se smanjuje, normalizira se za 2-5 dana. Ako aktivnost ostane povećana više od 5 dana, to ukazuje na povećanje upale.

Ø Pogoršanje kroničnog pankreatitisa

Ø Perforacija čira duodenuma

Inal Crijevna opstrukcija

Ø akutni upala slijepog crijeva

Ø Alkaloidi (morfij, heroin, kodein)

Ø Trovanje metanolom

Ø Velike doze etanola (za alkoholičare)

Hipoamilazemija - smanjenje aktivnosti amilaze u krvnom serumu (praktički nema dijagnostičku vrijednost).

Ø nekroza gušterače

Ø Infarkt miokarda

Hiperamalazurija - povećano izlučivanje amilaze u urinu.

Ø Akutni pankreatitis - povećava se aktivnost enzima tijekom prvih 24 sata upale. Povećano izlučivanje enzima u urinu traje sljedećih 7 do 10 dana, unatoč činjenici da je aktivnost amilaze u krvi nakon 3–4 dana normalna.

. Rak gušterače

Ø Perforacija čira duodenuma

Ø Žučni kamenac

Ø Bolesti žlijezda slinovnica, parotitis, kamenje u kanalima slinovnice

Hipoamilaza - smanjenje ispuštanja amilaze u urinu.

Ø Bolest bubrega

Ø Bolest jetre

"Određivanje aktivnosti alfa-amilaze u biološkim tekućinama unificiranom metodom Karavey"

Načelo: pod djelovanjem alfa-amilaze, škrob se hidrolizira kako bi se dobilo proizvode koji ne daju boju reakcije s jodom. Intenzitet smanjenja boje kompleksa jod-škrob po jedinici vremena je proporcionalan aktivnosti enzima.

Ispitivani materijal: svježi serum, urin.

Komplet uključuje:

Reagens №1 - tampon

Reagens br. 2 - koncentrirani supstrat

Reagens №3 - koncentrirana otopina joda

Reagens br. 4 - otopina kalijevog fluorida

Reagens br. 5 - klorovodična kiselina

Priprema reagensa za postupak analize:

Radna otopina podloge: reagensi br. 1 i 2 miješati u omjeru 24: 1.

Radna otopina joda: pomiješati destiliranu vodu, reagens br. 3 i reagens br. 4 u omjeru 7: 1: 2.

Radna otopina klorovodične kiseline: sadržaj boce 5 razrijediti destiliranom vodom 16 puta.

Tijek određivanja:

reagens

Iskusni uzorak

Kontrolni uzorak

BioXplorer

amilaza

a-amilaza [a - (l, 4) -glukan-4-glukanohidrolaza, KF 3.2.1.1] je enzim koji hidrolizira unutarnje 1,4-glikozidne veze škroba, glikogena i drugih polimera glukoze. U ljudi, glavni izvori a-amilaze su gušterača i žlijezde slinovnice. Brojne izoforme izolirane iz bioloških tekućina i ljudskih tkiva su vjerojatno heterogeni proizvodi post-translacijskih promjena dviju obitelji izoenzima amilaze, čija sinteza kodira dva lokusa gena Atu-1, tip salivarnog (C) amilaze i Atu-2, pankreas (P) Tip enzima, usko povezan s kromosomom 1. Izoenzimi C i P nemaju velike razlike u sastavu aminokiselina. Dvije izoforme izolirane su gel filtracijom na Sephadexu u frakciji C-amilaze, od kojih jedna sadrži ugljikohidrate. Molekularna masa izoformi koje sadrže ugljikohidrate, 57 kDa, bez ugljikohidrata - 55 kDa. Izoelektrične točke glavnih izoformi C-izoamilaza od 5,5 do 6,5. P-grupa izoamilaze ima manju molekularnu težinu (53 kDa) i ne sadrži ugljikohidrate. Izoelektrične točke ovih proteina su u rasponu od 5,7 do 7,0.

Uvjerljivi dokazi da se amilaza P-tipa formira samo u gušterači je odsutnost ovog izoenzima u pojedinaca s totalnom pankreathektomijom. Nasuprot tome, a-amilaza C-izoenzim može se sintetizirati u različitim organima i tkivima. Visoka aktivnost C-amilaze fiksirana je u tkivu jajovoda i sadržaju ciste jajnika. Specifična skupina izoamilaza koje proizvode tkiva ženskih genitalnih organa nije otkrivena u serumu ili urinu zdravih ljudi; distribucija izoamilaza identična je kod muškaraca i žena. Isoamilaze koje pripadaju skupini C također se nalaze u ljudskom mlijeku i tekućini za rane.

Klinički značaj određivanja aktivnosti amilaze u serumu.

Određivanje aktivnosti serumske α-amilaze najčešći je test za dijagnosticiranje akutnog pankreatitisa. Kod akutnog pankreatitisa, aktivnost enzima u serumu raste 3 do 12 sati nakon bolnog napada, doseže maksimum nakon 20-30 sati i vraća se u normalu s povoljnim tijekom unutar četiri dana. Aktivnost α-amilaze (diastaze) u urinu se povećava 6-10 sati nakon porasta serumske aktivnosti i vraća se u normalu, najčešće tri dana nakon porasta.

Danas je opće poznato da povećanje ukupne aktivnosti α-amilaze nije specifično za pankreatitis i druge bolesti gušterače. Kliničke studije su pokazale da se povećava aktivnost α-amilaze u brojnim bolestima, uključujući opstrukciju crijeva, bolesti žučnih puteva, upalu slijepog crijeva, parotitis i ektopičnu trudnoću. Osjetljivost i specifičnost određivanja α-amilaze u dijagnostici akutnog pankreatitisa raste s promjenama granica normalnih vrijednosti (diskriminacijska razina norme i patologija je aktivnost 1,5-2 puta veća od gornjih granica norme). U ovom slučaju, određivanje aktivnosti a-amilaze najinformativnije je prvog dana razvoja akutnog pankreatitisa. Prema nekim autorima, određivanje aktivnosti serumske α-amilaze u kroničnom pankreatitisu nema dijagnostičku vrijednost.

Kod ljudi, a-amilaza, koja slobodno prolazi kroz filtracijsku barijeru bubrežnih tijela, reapsorbira epitelne stanice bubrežnih tubula na isti način kao i drugi proteini seruma niske molekulske mase. Povećanje aktivnosti serumske amilaze može biti uzrokovano smanjenjem eliminacije enzima. Primjer je stanje nazvano makroamilazemija, kada je enzim vezan za serumske imunoglobuline i tvori kompleks makromolekula. Takav kompleks se ne filtrira u urin i ne može se ukloniti bilo kojim drugim mehanizmom, što dovodi do značajnog i ponekad produženog povećanja aktivnosti α-amilaze u krvnom serumu. Makroamilazemija se javlja kod zdravih ljudi s učestalošću od 1%, u osoba s hiperamilazemijom s učestalošću od 2,5%. Makroamilazemija se može dijagnosticirati metodom ultracentrifugiranja, ESP, gel kromatografijom, predložen je jednostavan test taloženja kompleksa s polietilen glikolom.

Aktivnost serumske α-amilaze često je povećana u zatajenju bubrega, ali nije posve jasno što uzrokuje to povećanje - povećanje formiranja enzima ili smanjenje njegove eliminacije. U takvim slučajevima, dodatne informacije mogu se dati određivanjem brzine izlučivanja α-amilaze ili izračuna klirensa enzima.

Prema mnogim autorima, najosjetljiviji i specifičniji test za dijagnozu pankreatitisa je razina aktivnosti P-izoenzima α-amilaze. Ovaj test je od posebne važnosti ako se u bolesnika s pretpostavljenom dijagnozom pankreatitisa nađe normalna ukupna aktivnost amilaze. Smanjenom aktivnošću P-amilaze može se dijagnosticirati kronični pankreatitis. Udio P-izoamilaze u ukupnoj aktivnosti α-amilaze značajno je viši u urinu nego u serumu, vjerojatno zbog razlika u izlučivanju izoenzima putem bubrega. Ipak, dijagnostička vrijednost određivanja aktivnosti izoenzima α-amilaze u mokraći slabija je od one u krvi.

Eksperiment - osnovna metoda znanosti
I promatranje i mjerenje uključeni su u tako složenu osnovnu metodu znanosti kao eksperiment. Za razliku od opažanja, eksperiment je karakteriziran intervencijom istraživača u položaj predmeta koji se istražuju, aktivnim utjecajem na predmet.

Tlo je jedinstvena komponenta biosfere
Krajem 19. stoljeća. V. Dokuchaev, veliki ruski prirodoslovac, svojim je studijama černozema i drugih tala ruske doline i Kavkaza utvrdio da su tla prirodna tijela u svojim vanjskim značajkama i svojstvima sila.

Analiza urina
Analiza urina je serija kemijskih i fizikalnih ispitivanja, čiji rezultati pokazuju specifičnu težinu i pH uzorka te prisutnost i razinu krvi, glukoze i drugih komponenti u uzorku. Od osnovnih podataka o kroničnom zatajenju bubrega i primanju.

amilaza

α-amilaza (diastaza, 1,4-a-D-glukan hidrolaza, EC 3.2.1.1.) katalizira hidrolizu α-1,4-glukozidnih veza škroba, glikogena i srodnih polisaharida u maltozu, dekstrinu i druge polimere. Molekularna masa enzima je oko 48.000 D. Molekula sadrži atom kalcija koji ne samo da aktivira enzim, već ga štiti od djelovanja proteaza, a aktivnost amilaze se povećava s utjecajem iona klora. U krvi je predstavljena s dva izoenzima: pankreasu - P-tip i S-tipom slinovnice, od kojih je svaki podijeljen u nekoliko frakcija. Izoenzim tipa S općenito je 45–70% (u prosjeku 57%), ostatak je u P-tipu. Oba izoenzima imaju gotovo identična katalitička i imunološka svojstva, neznatno se razlikuju u elektroforetskoj pokretljivosti, ali su dobro odvojena gel filtracijom na DEAE - Sephadexu. Tu je i makroamilaza, koja se ne izlučuje putem bubrega, ali se može naći u normalnom krvnom serumu (oko 1% zdravih ljudi) i patologiji (2,5%).

Visoka aktivnost amilaze opažena je u parotidnoj i pankreasnoj. Međutim, njegova aktivnost, iako mnogo niža, nalazi se u velikim i tankim crijevima, skeletnim mišićima, jetri, bubrezima, plućima, jajovodima, masnom tkivu. U krvi je enzim povezan s proteinima plazme i oblikovanim elementima. Aktivnost enzima jednaka je za muškarce i žene i ne ovisi o prirodi hrane koja se uzima i vremenu.

Postojeće metode proučavanja aktivnosti a-amilaze u biološkim tekućinama podijeljene su u dvije velike skupine:

1. Saharifikacija (reduktometrija), temeljena na proučavanju šećera nastalog iz škroba redukcijskim učinkom glukoze i maltoze.

2. Amiloklastika, na temelju određivanja ostatka neobrađenog škroba:

• prema stupnju intenziteta njegove reakcije s jodom. Ove metode su osjetljivije i specifičnije, ali njihova točnost uvelike ovisi o kvaliteti škroba i optimizaciji uvjeta određivanja.
• suspenzija viskoznosti škroba, nemaju visoku točnost i ne koriste se sada.

3. Metode s kromogenim supstratima - temelje se na uporabi kompleksa supstrata - boja, koji se pod djelovanjem α-amilaze razgrađuju kako bi se dobila vodotopiva boja.

4. Metode temeljene na spojenim enzimskim reakcijama:

Škrob + H₂O Maltose + Maltotriose + dekstrin

Maltoza + N₂Oko 2 glukoze

Glukoza + ATP glukoza - 6 - F + ATP

Glukoza-6-F + NADF glukonat-6-F + NADFN

Aktivnost enzima određena je brzinom nakupljanja NADPH.

Dvije amiloklastične metode odobrene su kao jedinstvene: Karavey (sa otpornim supstratom škroba) i Smith-Rohe.

Određivanje aktivnosti amilaze s obojenim
supstrat za tvrtku za zapošljavanje "Lachema"

načelo

α-amilaza katalizira hidrolizu netopljivog supstrata obojenog škroba kako bi se dobila plava boja topljiva u vodi. Količina oslobođene boje proporcionalna je katalitičkoj aktivnosti enzima.

Određivanje aktivnosti alfa-amilaze.

Alfa-amilaza (diastaza) je enzim koji provodi hidrolitičko cijepanje polisaharida do dekstrina, maltoze i glukoze. Konačni produkti amilaze ne daju boju reakcije s jodom. Žlijezde gušterače i slinovnice su najbogatije amilazom. Amilaza se luči u krv uglavnom iz tih organa.

Ljudska krvna plazma sadrži uglavnom dva tipa amilaze: pankreas i slinu, treći tip amilaze je velika ili makroamilaza. S urinom se uglavnom izlučuje amilaza pankreasa, što je jedan od razloga zašto je određivanje amilaze u urinu više informativno nego u krvi za procjenu funkcionalnog stanja gušterače. Vjeruje se da je 65% aktivnosti amilaze u mokraći uzrokovano amilazom pankreasa, dok je 60% amilolitičke aktivnosti u serumu osigurano amilazom žlijezda slinovnica. Kod akutnog pankreatitisa povećava se amilaza pankreasa u serumu na 89%, au urinu na 92% bez promjene indeksa salivarne amilaze.

Aktivnost amilaze u krvi i mokraći doživljava značajne promjene tijekom dana, kao i individualne razlike. Fluktuacije aktivnosti amilaze zahtijevaju njezino proučavanje u dnevnom urinu radi procjene funkcije pankreasa.

Postojeće metode za određivanje aktivnosti α-amilaze podijeljene su u 2 skupine:

1. Metoda završne točke temelji se na određivanju ostatka neprobavljenog škroba prema stupnju intenziteta njegove reakcije s jodom (metoda Karavey).

2. Kinetička metoda.

serumska a-amilaza - 16-30 g / h * 1

urin α-amilaza - 28-160 g / h * l

1. Serum se ne smije hemolizirati.

2. Uvjeti eksperimenta su od velike važnosti, posebno točno vrijeme inkubacije od 5 minuta, tako da se ne preporučuje istodobno proučavanje više od 5 seruma.

3. Određivanje aktivnosti α-amilaze u mokraći provodi se slično određivanju u krvi, međutim, u slučaju hiperamilaze, preporuča se razrjeđivanje urina s naknadnim ponovnim izračunom.

Djelovanje α-amilaze je pod utjecajem lijekova - antibiotika, lijekova protiv bolova i alkohola.

Povećanje aktivnosti amilaze javlja se uglavnom kod bolesti gušterače.

Kod akutnog pankreatitisa aktivnost enzima u krvi i urinu povećava se više od 10 puta. Hiperamalasemija se javlja odmah nakon početka bolesti, dostiže maksimum za 12-24 sata, nakon čega se aktivnost enzima brzo smanjuje i normalizira se za 2-6 dana. Tipično, hipramilazurija traje duže od povećanja aktivnosti enzima u serumu, dakle, 2-3 dana nakon bolnog napada, više je informativno odrediti aktivnost α-amilaze u urinu.

Kod kroničnog pankreatitisa, raka gušterače, povećanje enzimske aktivnosti nije toliko značajno. Osim toga, može doći do blagog porasta enzimske aktivnosti kod bolesti praćenih sličnom kliničkom slikom s akutnim pankreatitisom: akutni upala slijepog crijeva, peritonitis, perforirani čir na želucu itd.

Stoga izrazita amilazemija omogućuje diferenciranje akutnog pankreatitisa od kroničnih oboljenja gušterače, kao i drugih akutnih bolesti trbušne šupljine.

Gotovo uvijek amilazemiju prati amilazurija. Međutim, određivanje aktivnosti amilaze u mokraći manje je točan dijagnostički pokazatelj oslobađanje amilaze u urinu je povezano s funkcijom bubrega. Blagi porast amilaze u krvi uz smanjenje razine u mokraći može se objasniti kršenjem funkcije izlučivanja bubrega.

Smanjenje aktivnosti amilaze opaženo je s nekrozom gušterače, jetrenim bolestima (hepatitisom, cirozom), velikim opeklinama, dijabetesom, kaheksijom itd.

194.48.155.252 © studopedia.ru nije autor objavljenih materijala. No, pruža mogućnost besplatnog korištenja. Postoji li kršenje autorskih prava? Pišite nam | Kontaktirajte nas.

Onemogući oglasni blok!
i osvježite stranicu (F5)
vrlo je potrebno

Određivanje amilaze u biološkim tekućinama

Amilaza u krvi i razina ovog indikatora je normalna

• Što je ovaj enzim
• Metode određivanja
• norma
• Razlozi za povećanje
• niska čitanje

Jedna od važnih komponenti biokemijske analize krvi je proučavanje njegove enzimske aktivnosti. To određuje koncentraciju različitih enzima u plazmi, koje uglavnom proizvode određeni organi. Ova vrsta specifičnosti omogućuje im da se koriste kao dijagnostički kriteriji za uski raspon bolesti. U ovom članku ćemo raspraviti o takvom pokazatelju kao brzini amilaze, koji se odnosi na specifične markere patologije gušterače.

Što je ovaj enzim

Već dugi niz godina, neuspješno se boreći s hipertenzijom?

Voditeljica Instituta: „Začudit ​​ćete se kako je lako izliječiti hipertenziju, uzimajući je svaki dan.

Alfa-amilaza se smatra jednim od enzima pankreasnog soka (gušterače), koji je aktivno uključen u probavni proces. Proizvode ga egzokrine stanice i kroz izlučne kanale ulazi u duodenum, gdje je odgovoran za cijepanje složenih ugljikohidratnih komponenti do jednostavnijih. Oni su uključeni u razgradnju glikogena i škroba. Krajnji rezultat njihovog djelovanja trebala bi biti proizvodnja jednostavne glukoze, koju tijelo troši kako bi se vratile energetske potrebe stanica.

Ali amilaza treba teći isključivo u crijevni lumen. Normalno, mala količina ulazi u sistemsku cirkulaciju, jer svaka stanica u procesu vitalne aktivnosti ima izravan kontakt s krvlju. Sve dok se ne naruši integritet stanica gušterače, koncentracija enzima ne prelazi granice norme. Amilaza u krvi zbog svoje visoke enzimske aktivnosti, koja utječe na bilo koje tkivo tijela, može uzrokovati njihovo uništenje. Stoga se njegova količina treba održavati na konstantnoj razini.

Za liječenje hipertenzije, naši čitatelji uspješno koriste ReCardio. Vidjevši popularnost ovog alata, odlučili smo ga ponuditi vašoj pozornosti.
Pročitajte više ovdje...

Metode i testovi za određivanje aktivnosti amilaze u krvi

Amilaza u krvi cirkulira na taj način: enzim izlučuju stanice žlijezde gušterače, ulazi u krv i prenosi se do svih krvnih žila. U jetri je djelomično neutraliziran. Taj dio enzima koji nema vremena za kolaps prolazi kroz bubrežni filtar, gdje se koncentrira i izlučuje urinom. Ovaj mehanizam je osnova za određivanje koncentracije alfa-amilaze u različitim biološkim tekućinama.

Glavne analize uključuju:

• Biokemijska analiza za određivanje alfa-amilaze u krvi;
• Biokemijska analiza urina za određivanje amilaze u mokraći (analiza dijastaze).

U kliničkoj praksi često se koristi druga metoda, jer je tehnički mnogo lakša za izvođenje i ne zahtijeva uzimanje uzoraka krvi. Osim toga, on je osjetljiviji i specifičniji. Doista, u stabilno velikom volumenu krvi i izvanstanične tekućine, enzim je u razrijeđenom stanju nego u maloj količini urina. Stoga je aktivnost amilaze urina nekoliko puta veća od aktivnosti krvne plazme.

Uobičajena izvedba

Ocjenjujući rezultate analize, treba ih usporediti s određenim standardima. Važno je uzeti u obzir da norma podrazumijeva procjenu u određenim mjernim jedinicama. Stoga svakako obratite pozornost na one znakove koji su navedeni iza brojeva u stupcu rezultata analize. Štoviše, brzina amilaze, kako je određena u različitim laboratorijima, može se razlikovati zbog upotrebe reagensa različite osjetljivosti. Uobičajeno, laboratorij pokazuje pored rezultata.

Općenito prihvaćeni standardni pokazatelji dijastaze i alfa-amilaze u tablici.

Biokemiju, koja određuje aktivnost amilaze u krvi, karakterizira činjenica da je stopa amilaze kod žena i muškaraca identična. Spolni hormoni nemaju značajan učinak na taj enzim.

Uzroci i mehanizmi za povećanje pokazatelja

Ispravna interpretacija rezultata analiza za određivanje koncentracije amilaze u plazmi ili urinu može stvarno pomoći u dijagnostici brojnih bolesti. U kliničkoj praksi najčešće se susreću situacije u kojima je amilaza ili dijastaza povišena. To pokazuje što je nastalo:

• Povećana sekretorna aktivnost gušterače;
• Prisutnost prepreka u kanalima gušterače ili njihova kompresija, što komplicira odljev pankreasnog soka koji sadrži amilazu;
• Oboljenje tkiva gušterače je traumatično, upalno, nekrotično (destruktivno) ili neoplastično.

Stoga se povećanje alfa-amilaze u krvi i diastaze u urinu odnosi na specifične markere za takve bolesti gušterače i njegovih kanala:

1. Uz pogoršanje kroničnog pankreatitisa;
2. Kod akutnog pankreatitisa, fokalna nekroza gušterače (samo-uništavanje tkiva žlijezde enzimima), peripankreatična infiltracija ili u početnim stadijima teške nekroze gušterače;
3. Rak gušterače. Brzina amilaze premašuje se u većoj mjeri kada se tumor nalazi u glavi i tijelu organa;
4. Različiti tipovi holelitijaze s koledoholitijazom (migracija kamena u žučne kanale);
5. Poraz velike duodenalne bradavice dvanaestopalačnog crijeva u obliku stenotičnog papilitisa, zaglavljenog kamenja i tumora raka.

Povećana aktivnost amilaze u drugim bolestima i stanjima

Ponekad se morate suočiti sa situacijama u kojima nema očitih problema s gušteračom, ali pokazatelji alfa-amilaze i diastaze nadilaze normalni raspon. To znači da postoje:

• Pogreške u prehrani;
• Korištenje alkoholnih pića;
• Pogoršanje kroničnog holecistitisa i upalnih procesa u jetri;
• Ektopična trudnoća;
• Upalno-destruktivne bolesti abdominalnih organa (perforirani čir, upala slijepog crijeva, peritonitis, crijevna opstrukcija i dr.);
• Virusne infekcije praćene poliglandulitisom (višestruke upalne promjene u gotovo svim slinovnicama i gušterači). To se događa s parotitisom, citomegalijom i infekcijom virusom Epstein-Barr.

niska čitanje

Rijetko se zahtijeva dešifriranje testova, čiji rezultati bilježe smanjenje aktivnosti amilaze u krvi. Ali ipak, ponekad se morate suočiti s tim. To je moguće s:

• Potpuna ili gotovo potpuna destrukcija gušterače kao posljedica nekroze gušterače;
• Transformacija raka većine gušterače, u kojoj praktički nema normalnih stanica sa sačuvanim funkcionalnim sposobnostima;
• Uklanjanje cijele ili subtotalne resekcije gušterače;
• Genetski poremećaji enzimske aktivnosti u tijelu (cistična fibroza).

Razina amilaze u krvi i urinarnoj dijastazi je pouzdani vodeći brod koji ukazuje na smjer dijagnostičkog puta za bolesti gušterače. Ispravna procjena testova u kombinaciji s usporedbom rezultata drugih vrsta istraživanja ostavlja male šanse da niz bolesti prođe neopaženo.

Klinička i dijagnostička vrijednost određivanja aktivnosti alfa-amilaze

U krvi i urinu

Aktivnost alfa-amilaze u krvi i urina tijekom dana (kao i od jednog dana do drugog) značajno varira. Osim toga, uočene su značajne individualne razlike ovih ispitanika u ispitanika bez patologije probavnih organa. S obzirom na fluktuacije u izlučivanju alfa-amilaze u urinu, preporuča se istražiti aktivnost enzima u urinu prikupljenom dnevno.

Promjene u aktivnosti alfa-amilaze u krvi i mokraći javljaju se tijekom trudnoće. Hyperamylasemia. Aktivnost alfa-amilaze značajno se povećava kod bolesti gušterače. Kod akutnog pankreatitisa aktivnost enzima u krvi i urinu povećava se 10-40 puta. Hiperamilazemija se javlja na početku bolesti, dostiže maksimalno 12-24 sata nakon razvoja, zatim se brzo smanjuje i postiže normu za 2-6 dana.

Aktivnost enzima može se povećati u brojnim bolestima koje imaju sličnu kliničku sliku s akutnim pankreatitisom, a to su: akutni upala slijepog crijeva, peritonitis i perforirani čir na želucu i dvanaesniku. U bolesnika s peritonitisom povećanje aktivnosti amilaze posljedica je razvoja bakterija koje tvore amilazu. Aktivnost enzima u tim patološkim stanjima obično se povećava 3-5 puta.

Bolesti koje uzrokuju relativno malu hiperamilazemiju ne-pankreasnog podrijetla (tj. Bez izravnog utjecaja na samu gušteraču) uključuju kolecistitis, kolelitijazu, stanje povezano s rupturom žučnog mjehura, bolesti bubrega, zatajenjem bubrega, oštećenjem metastaza karcinoma u plućima i oštećenjem žlijezda slinovnica. s obturacijom njihovih kanala (jasna klinička slika parotitisa olakšava objašnjenje hiperamilazemije), prostatitis, traumatsku ozljedu mozga, traumatski šok, opekline, upala pluća, dijabetička ketoacidoza, pobačaj, postoperativno razdoblje.

Aktivnost alfa-amilaze u serumu također se povećava s perforacijom jednjaka, čira na želucu, gastritisom, akutnom opstrukcijom crijeva, ishemijom i infarktom tankog crijeva, peritonitisom, rupturom cijevi tijekom ektopične trudnoće, salpingitisom, aneurizmom aorte.

Glavni uzroci hiperamilazemije su: oštećenje izlučivanja iz žlijezda (proizvođači alfa-amilaze), povećana propusnost histoematogene barijere u žlijezdama, nekroza tkiva, oslabljeno otpuštanje enzima kroz bubrežni filtar.

Neki drugi hormoni i mnogi farmakološki lijekovi, uglavnom agensi koji dovode do redukcije sfinktera Oddija, uzrokuju adrenalin: adrenalin, histamin, sekretin, furosemid, salicilati, antikoagulansi, morfin, pantopon, opijum, kodein, tetraciklin i alkohol.

Unatoč činjenici da je hiperamilazemija gotovo uvijek praćena peramilazurijom, određivanje aktivnosti alfa-amilaze u urinu ne mora uvijek biti točan dijagnostički pokazatelj, jer je otpuštanje amilaze u urin povezano s funkcijom bubrega. Osim toga, bubrezi izlučuju samo 24% amilaze koju luče probavne žlijezde iz krvi.

Proučavanje aktivnosti alfa-amilaze u dnevnom mokraći pouzdaniji je biokemijski test za otkrivanje bolesti gušterače nego istraživanje temeljeno na analizi jednog njegovog dijela. Nakon djelovanja alfa-amilaze u krvi nakon što se napad pankreatitisa vrati u normalu, može ostati povišen u urinu do 7 dana.

Koeficijent "aktivnost alfa-amilaze u krvi / aktivnost alfa-amilaze u urinu" je pokazatelj funkcionalne korisnosti renalnog filtra.

Hipoamilamin u kliničkoj praksi je rijedak. Primijećeno je u bolesnika s bolestima jetre (hepatitis, ciroza), malignim tumorima (osobito u prisutnosti metastaza u jetri), velikim opeklinama, koži, dijabetesu, hipotiroidizmu, uobičajenim poremećajima u prehrani, gubitku težine, kaheksiji i pod utjecajem intoksikacije ( na primjer, u slučaju toksikoze u trudnica). Smanjenje aktivnosti alfa-amilaze najčešće ukazuje na nedostatnost egzokrine funkcije sub-želučane žlijezde. Uvođenje citrata i oksalata dovodi do smanjenja aktivnosti enzima.

Određivanje ukupne aktivnosti laktat dehidrogenaze

Laktat dehidrogenaza (L-laktat; NAD-oksidoreduktaza, EC 1.1.1.27) je glikolitički (citosolni cink-sadržan) enzim (molekulska masa 135.000 D) koji reverzibilno katalizira oksidaciju L-laktata u piruvičnu kiselinu. Nezaobilazni sudionik u ovoj reakciji je oksidirani nikotin adenin dinukleotid, koji se koristi kao kofaktor enzima koji igra ulogu akceptora vodika.

Reakcija katalizirana laktat dehidrogenazom može se prikazati kako slijedi:

SNSNONSOO "+ OVER + Laktat dehidrogenaza SNSSOSOO '+ OVER • H + H +

Enzim je široko rasprostranjen kod ljudi. Prema stupnju smanjenja enzimske aktivnosti, organi i tkiva se mogu rasporediti u sljedećem redoslijedu: bubrezi, srce, skeletni mišići, gušterača, slezena, jetra, pluća, krvni serum. U potonjem, pronađeno je nekoliko različitih proteina (izoenzima) koji posjeduju katalitička svojstva ovog enzima. Promjene u strukturi proteinskog dijela izoenzima određuju njihove različite fizikalno-kemijske osobine (osobito različite elektroforetske pokretljivosti u agaru, škrobu, poliakrilamidu i drugim gelovima).

U plazmi (serumu) krvi identificirano je pet laktatnih dehidrogeaznih izoenzima - LDG1, LDG2, LDGz, LDG4, LDG5 - koji su smješteni u gelu u redoslijedu opadanja njihove elektroforetske pokretljivosti.

Svaki od izoenzima je tetramer koji tvore podjedinice H i M. Utvrđeno je da frakcija LDH1 uglavnom potječe iz tkiva srca, LDH5 - iz jetre. LDH u citoplazmi stanica i serumu je predstavljen s 5 izoenzima.

M podjedinica se nalazi uglavnom u tkivima s anaerobnim metabolizmom, dok je H podjedinica prisutna u tkivima s prevladavajućim aerobnim procesima. Metoda elektroforeze na nosačima pomaže u podjeli svih 5 izoenzima LDH, koji predstavljaju sljedeći postotak u krvnom serumu zdravih ljudi: LDH; (14–26%), LDH (29–39%), LDH (20–26%), LDH4 (8-16%), LDH (6–16%) - V.N. Titov i sur. (1988).

Laktat dehidrogenaza sadržana je ne samo u plazmi, već iu značajnim količinama u crvenim krvnim zrncima, tako da serum koji se koristi za analizu mora biti svjež, bez hemolize.

Metode za određivanje ukupne aktivnosti LDH podijeljene su u dvije glavne skupine: 1) kinetičke, temeljene na Warbur-optičkom testu (optički efekt povezan s pretvorbom NAD u NAD • N, i obrnuto) i 2) metode koje određuju količinu nastalog proizvoda ili potrošenog supstrata nakon fiksnog perioda inkubacije (metode završne točke).

Rad br. 32 Kolorimetrijska metoda dinitrofenilhidrazina za određivanje aktivnosti laktat dehidrogenaze u krvnom serumu (prema Sevelu i Tovareku)

Načelo metode. L-laktat u alkalnom mediju u prisutnosti LDH u serumu i dodan NAD oksidira se u piruvat. Prema stupnju njegovog formiranja i ocjenjuje se aktivnost enzima.

reagensi

1. 0,45 mol / l otopine natrijeve mliječne kiseline. U volumetrijsku tikvicu zapremine 100 ml dodajte 5 ml mliječne kiseline u koncentraciji od 800 g / l i 10 ml mliječne kiseline u koncentraciji od 400 g / l i neutralizirajte je s 2N otopinom natrijevog hidroksida u slabo alkalnu reakciju s pH 7,5 (pomoću fenolftaleina treba razviti slabu kiselinu) ružičaste boje). Volumeni se dovedu do oznake destiliranom vodom.

2. 0.03 mol / l otopina natrijevog pirofosfata, pH 8.8. U volumetrijsku tikvicu kapaciteta 500 ml dodajte 6,69 g Na₂ P₂O₅ • N₂Oko 50 ml dijete razrijeđene vode, smjesa se temeljito promiješa i pH otopine se podesi na 8,8 s 1N otopinom HCl. Volumen sadržaja tikvice se podesi na oznaku s destiliranom vodom. Reagens je stabilan jedan mjesec kada se čuva u hladnjaku.

3. Otopina NAD. 3 mg NAD (kemijski čistog) se otopi u 1 ml destilirane vode (brzinom od 0,6 mg po uzorku). Reagens je stabilan 4 tjedna kada se čuva u hladnjaku.

4. Otopina 2,4-dinitrofenilhidrazina. 19,8 mg 2,4-dinitrofenilhidrazina otopljeno je u malom volumenu 1N otopine klorovodične kiseline zagrijavanjem smjese u vodenoj kupelji. Nakon hlađenja, volumen je podešen na 1 ml s 1N klorovodičnom kiselinom. Sljedećeg dana, reagens se filtrira. Otopina se pohranjuje u posudu od tamnog stakla, koja se može koristiti godinu dana.

5. 0,4 n otopina natrijevog hidroksida.

6. 1 n otopina klorovodične kiseline.

7. Standardna otopina natrij piruvične kiseline. 11 mg kristalne natrijeve piruvične kiseline otopi se u maloj količini destilirane vode, prebaci u volumetrijsku tikvicu od 100 ml, a volumen otopine se nadopuni do oznake destiliranom vodom. 1 ml otopine sadrži 110 ug natrijevog piruvata, što odgovara 88 ug piruvične kiseline. Radna standardna otopina se priprema razrjeđivanjem glavnih 10 puta destiliranom vodom. U 1 ml radne otopine od 8,8 μg piruvične kiseline.

Tijek određivanja. 0,1 ml seruma razrijeđenog 1: 2 pomiješa se s 0,3 ml otopine NAD i grije se 5 minuta na 37 ° C. Zatim 0,8 ml otopine za zagrijavanje fosforne kiseline i 0,2 ml otopine natrijeve mliječne kiseline, prethodno zagrijane na 37 ° C. Smjesa se inkubira na 37 ° C 15 minuta, a nakon inkubacije uzorak se puni s 0,5 ml 2,4-dinitofenilhidrazina i drži na sobnoj temperaturi 20 minuta. Zatim dodajte 5 ml otopine natrijevog hidroksida, pomiješajte sadržaj epruvete i nakon 10 minuta

Apsorpcija se mjeri u rasponu valnih duljina od 500–560 nm, na primjer u PEC-u sa zelenim svjetlosnim filtrom u kiveti debljine sloja od 10 mm. Zabilježite optičku gustoću uzorka, uzimajući u obzir kontrolu apsorpcije.

Kontrolni uzorak se stavlja na isti način kao eksperimentalni, ali se nakon inkubacije smjese doda razrijeđeni serum 1: 2. Izračunajte aktivnost enzima prema kalibracijskom grafikonu. Aktivnost laktat dehidrogenaze izražena je u mmolu piruvične kiseline, koja nastaje inkubiranjem 1 1 seruma tijekom 1 h na 37 ° C.

Da biste dobili podatke za izradu kalibracijskog grafikona, morate učiniti sljedeće. Iz radne otopine natrijeve piruvične kiseline pripremite niz razrjeđenja (Tablica 2). Zatim ulijte 0,5 ml otopine 2,4-dinitrofenilhidrazina u epruvete. Zatim obradite standardne uzorke na isti način kao i iskusni.

Pri stavljanju kontrolnog uzorka u epruvetu dodajte 0,6 ml destilirane vode, 0,8 ml otopine pirofosfata i 0,5 ml otopine 2,4-dinitrofenilhidrazina. Zatim se uzorak tretira na sličan način.

Da bi se pronašli pokazatelji aktivnosti laktat dehidrogenaze u dimenziji "mmol piruvične kiseline po 1 litru seruma po 1 satu inkubacije na 37 ° C", broj μmol piruvične kiseline u standardnom uzorku pomnoži se s faktorom 120 ili količinom μg piruvične kiseline - za 1,41.

Da biste izrazili aktivnost enzima u jedinicama nove dimenzije, možete primijeniti drugu formulu:

Aktivnost laktat dehidrogenaze u mmol / (h • l) = C • 120: 88,

gdje je C količina μg piruvične kiseline u uzorku, 120 je faktor konverzije od μg piruvične kiseline u mg, 88 je faktor za pretvaranje indikatora iz mg u mmol.

Prilikom konstruiranja kalibracijskog grafikona na apscisi, vrijednosti enzimske aktivnosti izražene su, izražene u dimenzijama, mmol DCH1) i prikazane u posljednjem stupcu tablice 33. Pravocrtna veza između koncentracije piruvične kiseline i optičke gustoće je od 0 do 10 mmol / (h • 1).

Klinička i dijagnostička vrijednost određivanja aktivnosti amilaze

Amilaza je enzim koji razgrađuje škrob i glikogen. Najbogatiji su gušterača i žlijezde slinovnice. Sadržaj amilaze u serumu povezan je s unosom hrane: tijekom dana aktivnost je veća nego tijekom noći.

Aktivnost amilaze u serumu se povećava (hiperamilazemija) sa:

Akutni pankreatitis (10-30 puta, normalno za 6-7 dana, ako aktivnost ostaje povećana više od 5 dana, to ukazuje na razvoj kroničnog procesa);

Pogoršanje kroničnog pankreatitisa;

Parotitis (upala žlijezda slinovnica);

Mogu biti uzrokovani alkoholom, adrenalinom, drogama.

Smanjenje aktivnosti amilaze u serumu (hipoamilazemija) uočeno je kada:

Bolesti jetre (hepatitis, opstruktivna žutica, ciroza);

Povećana aktivnost u mokraći (hiperamlaza) opaža se kada:

Akutni pankreatitis (ima veću dijagnostičku vrijednost od definicije u serumu, jer traje više od 7 dana);

Smanjenje aktivnosti enzima u mokraći (hipoamilaza) uočeno je kada:

Odgovorite na pitanja:

Navedite mjesto lokalizacije, optimalni pH i biološku vrijednost amilaze.

Napišite reakciju koju katalizira amilaza.

Koja klasa enzima amilaze?

* Koje su glavne bolesti koje karakterizira povećana aktivnost amilaze. Objasnite razlog.

* Recite nam o uzrocima, vrstama, laboratorijskoj dijagnozi i prevenciji pankreatitisa.

3.8. Praktični rad "Određivanje aktivnosti serumske aminotransferaze".

Ciljevi praktičnog rada:

proučavanje kliničke i dijagnostičke vrijednosti određivanja serumskih aminotransferaza;

naučiti odrediti aktivnost aminotransferaza u serumu.

Zadaci za samostalan rad:

Napišite u bilježnicu princip i metodologiju praktičnog rada.

Opremite radno mjesto za praktičan rad.

Obaviti praktičan rad.

Izvršite potrebne izračune.

Ispunite obrazac za analizu. Ocijenite rezultate.

Zaključite rad i crteže.

Odgovorite na dodatna pitanja.

Kao rezultat transaminacije, koja se odvija pod djelovanjem AsAT i AlAT, formiraju se oksaloacetat i piruvične kiseline. Kada se doda otopina 2,4-dinitrofenilhidrazina, prestaje enzimski proces i pojavljuju se hidrazoni piruvične kiseline. U alkalnom mediju daju boju, čiji je intenzitet proporcionalan količini nastale piruvične kiseline.

1. Referentna otopina natrijeve piruvične kiseline - 2 mmol / l.

2. 2,4 - dinitrofenilhidrazin - 1 mmol / l.

3. Natrijev hidroksid - 0,4..

4. Podloga AsAT / AlAT.

2. FEC, kivete po cm.

4. Stalak za epruvete.

5. Pipete za 1 i 5 ml.

Provesti ispitivanje aktivnosti aminotransferaza u serumu prema tablici.

Dijagnostička vrijednost određivanja aktivnosti serumske amilaze

Kod ljudi se alfa-amilaza luči od gušterače i žlijezda slinovnica, njezina mala aktivnost se nalazi u tkivima jetre i skeletnih mišića. Molekularna masa alfa-amilaze je relativno niska, za razliku od većine enzima, filtrira se u glomerulima bubrega i sadrži urin. Alfa-amilaza se sastoji od dva izoenzima: tipa pankreasa (P-tip) i salivarnog (S-tipa). U zdravih ljudi, serum čini oko 70% amilolitičke aktivnosti u izoenzimu slinovnice, u mokraći približno isti postotak je izoamilaza pankreasa.

Hiperamilazemija i hiperamalazurija opaženi su u mnogim bolestima, ali su najizraženiji kod akutnog pankreatitisa, kod kojeg se aktivnost uglavnom povećava (do 90% ili više) zbog izoenzima gušterače. Uz ovu bolest, najveća količina amilaze u krvi i urinu zabilježena je u prvih 1-3 dana. Virusni hepatitis i rak gušterače također uzrokuju hiperamilazuriju pankreasa podrijetla gušterače.

Ne-pankreasnom hiperamilazemijom uključuju oštećenje žlijezda slinovnice, zatajenje bubrega. Razlozi za povećanje b-amilaze u krvi su oslabljeno izlučivanje žlijezda koje sadrže b-amilazu, nedostatak izlučivanja amilaze iz tijela iz bubrega.

Mnoge farmakološke tvari, kortikosteroidi, salicilati, tetraciklin, furosemid, histamin uzrokuju hiperamalasemiju. Za b-amilazu krv karakteriziraju široke intra- i interindividualne varijacije. Najinformativnija je definicija izoamilaze pankreasa.

Promjena aktivnosti alfa-amilaze u patologiji.

Određivanje aktivnosti alfa-amilaze postiže kliničku i dijagnostičku vrijednost u dijagnostici i praćenju bolesti gušterače, probavnog sustava, oštećenja organa trbušne šupljine. U nekim slučajevima (na primjer, kod bolesti gušterače), aktivnost samo jednog izoenzima, alfa-amilaze pankreasa, od dijagnostičke je važnosti; kod praćenja bolesti probavnog trakta potrebno je usporediti aktivnost enzima u serumu (sekretorna aktivnost i dodatna apsorpcija iz trbušne šupljine) i urina (često je stupanj amilazurija stabilniji i dugotrajniji pokazatelj od amilazemije).

Povišene vrijednosti aktivnosti alfa-amilaze opažene su s:

Upalne bolesti gušterače (akutni, otečeni, kronični, reaktivni pankreatitis). Hiperamilazemija je obično akutna (10-40 puta veća), ali često kratkotrajna, značajna je i hiperamilaza, ali se razina alfa-amilaze u urinu smanjuje mnogo sporije nego u krvnoj plazmi (serumu). Ovo svojstvo je prikladno koristiti kada se "kasno" dijagnostičko ispitivanje pacijenta s kliničkim znakovima pankreatitisa, međutim, za praćenje tijeka procesa, aktivnost enzima obično mjeri u obje biološke tekućine. Valja napomenuti da teški oblici lezija gušterače s prijetnjom nekroze tkiva, kao i pankreatitis, praćeni ozbiljnim poremećajima metabolizma lipida, mogu biti praćeni stvarnim ili lažnim (zbog inhibicije amilaze triacilgliceridima) smanjenjem enzimske aktivnosti. Stoga, ako se sumnja na bilo koji oblik pankreatitisa, dijagnostički je važno ne samo odrediti aktivnost alfa-amilaze u urinu i serumu, nego i izračunati klirens amilazo-kreatinina po formuli:

Kod akutnog pankreatitisa ova izračunata vrijednost prelazi 6%. Proračun klirensa vam omogućuje da ne napravite korekciju za volumen i vrijeme sakupljanja urina i učinite rezultat manje ovisnim o korištenim metodama određivanja.

Bolesti abdominalne šupljine, sa sličnim simptomima s akutnim pankreatitisom: akutni upala slijepog crijeva, peritonitis, perforirani čir na želucu i čir na dvanaesniku. Aktivnost alfa-amilaze povećava se za oko 3-5, rijetko 10 puta, glavni uzrok hiperemijemije nije toliko povećano izlučivanje enzima, koliko njegova sekundarna apsorpcija iz trbušnih organa u krv. Za razlikovanje dijagnoze provodi se određivanje alfa-amilaze i kreatinina u urinu i izračunavanje klirensa kreatinina pomoću gornje formule. Uz stalnu vrijednost klirensa od 1 do 4%, treba posumnjati na bolesti abdominalnih organa, pretvarajući se u akutni pankreatitis.

Iz istog razloga, aktivnost alfa-amilaze značajno se povećava kod perforacije jednjaka, gastritisa, akutne opstrukcije crijeva, ishemije i infarkta tankog crijeva, rupture cijevi, salpingitisa, aneurizme aorte.

Kod bolesti unutarnjih organa koje nisu izravno povezane s probavnim sustavom, moguće je umjereno povećanje aktivnosti ukupne alfa-amilaze i / ili njezinih izoenzima. Takve bolesti uključuju: kolecistitis, holelitijazu, oštećenje parenhima bubrega i upalne bolesti ovog organa, zatajenje bubrega, prostatitis, dijabetičnu ketoacidozu, metastaze malignih tumora u tkivima i organima (posebno u plućima, gušterači, poprečni debelog crijeva). Ako se sumnja na gore opisane bolesti, provodi se komparativna analiza ukupne i pankreasne alfa-amilaze, budući da se bolesti izoenzima uglavnom povećavaju u opisanim bolestima (onkološko oštećenje gušterače i poprečni debelog crijeva povećava aktivnost i P i S izoenzima, što omogućuje razlikovanje i izoenzima P i S, što omogućuje razlikovanje od upalnih bolesti istih organa).

Hiperamalasemija podrijetla bez pankreasa također se javlja kod bolesti pljuvačnih žlijezda i određenih moždanih patologija. U ovom slučaju, povećanje ukupne aktivnosti alfa-amilaze također se javlja zbog povećanja aktivnosti izoenzima salive, a za razlikovanje dijagnoze treba provesti paralelno mjerenje ukupne i pankreasne alfa-amilaze (s normalnom aktivnošću P-amilaze, može se posumnjati na gore navedenu patologiju).

Usporedna analiza aktivnosti alfa-amilaze u mokraći i serumu također je vrijedan dijagnostički parametar u procjeni patologije bubrega. Kada je renalna filtracija smanjena (u nefrotskom sindromu, glomerulonefritisu itd.), Aktivnost alfa-amilaze u urinu je naglo smanjena, dok je u krvi zabilježena umjerena ili značajna hiperamlazemija, stoga je koeficijent serumske amilaze / amilaze urina jedan od glavnih dijagnostičkih parametara. s ovom patologijom.

Postoperativni uvjeti (sustavni upalni odgovor na operaciju, razvoj ARDS, itd.) Također mogu uzrokovati umjerenu hiperamilazemiju.

Smanjenje aktivnosti alfa-amilaze obično prati smanjenje funkcionalne aktivnosti gušterače, uzrokovano oštećenjem parenhima organa i / ili narušenom egzokrinskom regulacijom, a najčešće se događa kada:

Nekrotične promjene u gušterači povezane s hemoragijskim pankreatitisom i ukupnom nekrozom pankreasa.

Kod bolesti jetre (hepatitis, ciroza). Maligni tumori, osobito u metastazama jetre.

Teška endokrina neravnoteža: hipotiroidizam, dijabetes melitus, hiperlipemija (osobito s viškom triacilglicerida, zbog inhibicije aktivnog centra enzima), s općim poremećajem u prehrani, cachexia i toksikoza trudnica.

U nekim slučajevima, s gore opisanim patologijama, serumska aktivnost alfa-amilaze se ne može smanjiti, ali ostaje nepromijenjena.

Glavni odnosi u diferencijalnoj dijagnozi patologija sa sličnim simptomima.

Najčešći omjeri su:

Komponenta ukupne alfa-amilaze / pankreasa. Koristi se u diferencijalnoj dijagnostici upalnih i malignih procesa u abdominalnim organima i nekim drugim tkivima. U upalnim procesima koji ne utječu na gušteraču, glavni izvor aktivnosti ukupne alfa-amilaze je enzim slina, stoga je omjer “ukupna amilaza / pankreasna izoforma”> 1. Kod malignih oštećenja trbušnih organa, doprinos oba izoenzima je približno jednak, a taj koeficijent je približno jednak 1, 8-2,4. Uz sudjelovanje gušterače u upalnom procesu ili u prisutnosti tumorskih metastaza u njemu, omjer aktivnosti ukupne i pankreasne amilaze ne prelazi 1,5.

Ukupna alfa-amilaza / kreatinin u urinu i serumu. Koristi se izračunati klirens (formula je dana u točki 3), što omogućuje razlikovanje upalnog procesa u gušterači (koeficijent veći od 6%) i abdominalnih organa (1-4%).

Ukupna serumska alfa-amilaza / ukupna alfa-amilaza urina. Koristi se za procjenu funkcionalne aktivnosti bubrežnog filtra. Kod nefrotskog sindroma i glomerulonefritisa koeficijent je veći od 2-2,5.

Ukupna serumska alfa-amilaza / serumski trigliceridi. Omjer je "inverzan", jer višak triacilglicerida može inhibirati aktivnost alfa-amilaze. Omogućuje razlikovanje patološkog smanjenja proizvodnje enzima i interferencije s hiperipmijom.

Ukupna serumska alfa-amilaza / pankreasna lipaza. Biološko i dijagnostičko značenje koeficijenta slično je prethodnom omjeru, jer je prisutnost slobodnih triacilglicerida u serumu izravno povezana s aktivnošću lipaze pankreasa. Omjer je izravan.

Promjene u aktivnosti alfa-amilaze u zdravih ljudi. Interferencija s drogama.

Aktivnost alfa-amilaze u krvnoj plazmi zdravih ljudi u velikoj mjeri ovisi o prirodi prehrane i hrani koja prevladava u prehrani. Osim toga, ovaj parametar snažno ovisi o intenzitetu metaboličkih procesa u pojedinom pojedincu, kao io aktivnosti mozga subjekta. Prema tome, aktivnost enzima u istom pojedincu u različito vrijeme (čak i tijekom istog dana) može varirati u rasponu od 25-50% u oba smjera.

Hiperamilazemija u zdravih ljudi može biti uzrokovana emocionalnim stanjem (stres, povećana mentalna aktivnost), pijenje (čak i jednom) alkohola, a također je povezano s prehranom bogatom proteinima i iscrpljenim ugljikohidratima i šećerima. Hipoamilazemija se javlja s povećanim iskorištavanjem glukoze, s postom, aktivnim vježbanjem, kao i kod osoba s hiperlipidemijom, čak iu nedostatku njezinih kliničkih manifestacija.

U trudnoći do 19 tjedana aktivnost alfa-amilaze se smanjuje u usporedbi s normom, u razdoblju do 33-34 tjedna gestacije, razina aktivnosti se povećava, a za 37-40 tjedana stabilizira se na razini 10-20% višoj od aktivnosti enzima kod zdravih ne-trudnih žena,

Na djelovanje alfa-amilaze i njezinog izoenzima pankreasa značajno utječe i uporaba niza uobičajenih lijekova koje praktički koriste zdravi ljudi u slučaju prolaznih infektivnih i upalnih bolesti - na primjer tetraciklinskih antibiotika, furosemida, kortikosteroidnih protuupalnih lijekova, salicilata.

Isto tako, značajan utjecaj na aktivnost alfa-amilaze imaju lijekovi koji dovode do smanjenja sfinktera Oddija, uključujući hormone (adrenalin, histamin, sekretin), narkotičke tvari (morfij, pantopon, opijum, kodein) i druge lijekove koji povećavaju izlučivanje enzima i potisnuti izlučivanje izlučivanja iz gušterače.

Na temelju biofile.ru

Načelo metode: Maltotrious povezan s kromogenom 2-kloro-p-nitrofenolom koristi se kao supstrat za a-amilazu. Pod djelovanjem a-amilaze, supstrat se hidrolizira radi oslobađanja obojenog 2-kloro-p-nitrofenola, maltotrioze i glukoze. Reakcija se odvija brzo i ne zahtijeva prisutnost koenzima u reakcijskoj smjesi. Brzina hidrolize supstrata izravno je proporcionalna aktivnosti a-amilaze u uzorku i mjeri se spektrofotometrijski na valnoj duljini od 405 nm.

Supstrat-CNF ————> CNF + glukoza + maltotrioza

Linearnost metode: do 1500 U / l.

a-amilaza u ne-hemoliziranom serumu ostaje stabilna na sobnoj temperaturi (18-25 ° C) 7 dana, pri temperaturi skladištenja od 2 do 8 ° C tijekom 2 mjeseca.

1) spektrofotometar s kontroliranom temperaturom kivete, valne duljine 405 nm, s optičkom dužinom od 1 cm; temperatura reakcije 37 ° C;

3) automatske pipete za 25 μl i 1000 μl;

Salivarna tekućina se također može koristiti kao izvor enzima (slina je prethodno razrijeđena destiliranom vodom 100 puta), ali raspon normi uvelike varira.

6) Radni reagens (supstrat - 1,8 mmol / l u MES-puferu (pH 6,0 ± 0,1)).

Radni reagens prikladan je za uporabu ako njegova optička gustoća nije veća od 0,6 jedinica optičke gustoće. na valnoj duljini od 405 nm i nema zamućenja.

Prije analize reagensi trebaju biti zagrijani do temperature mjerenja (37 ° C).

Promiješajte sadržaj epruvete i uključite štopericu. Izmjerite optičku gustoću uzorka prema destiliranoj vodi u duljini od 405 nm za točno 1 minutu. Ponovite mjerenje 3 puta u intervalu od 1 min. Izračunajte promjenu optičke gustoće u minuti, a zatim izračunajte prosječno mjerenje optičke gustoće u minuti (Dop / min).

Izračunavanje faktora a-amilaze provodi se pomoću formule:

gdje je Dop / min prosječna promjena optičke gustoće u minuti;

1,025 - ukupni volumen otopine u kiveti;

1000 je faktor konverzije ml u 1;

12.9 - milimolarni koeficijent apsorpcije 2-kloro-p-nitrofenola;

0,025 je volumen seruma u ml;

1,0 je duljina optičkog puta.

Kod izmjene navedenih parametara potrebno je ponovno izračunati faktor. Ako aktivnost a-amilaze prelazi 1500 U / l (točka izvan linearnosti kalibracijskog grafa), analizirani serum treba razrijediti 1: 1 slanom otopinom i mjerenje treba ponoviti, a rezultat izračuna pomnožiti s 2.

Klinička i dijagnostička vrijednost: a-amilaza je endohidrolaza, au ljudskom tijelu nekoliko izoenzima: enzim izlučuju žlijezde slinovnice (S-tip), gušterača (P-tip); mala enzimska aktivnost se nalazi u jetri, skeletnom mišiću, suznoj tekućini, lučenju mliječnih žlijezda i raznih tumora.

Aktivnost a-amilaze u serumu značajno se povećava zbog P-izoenzima u raznim bolestima gušterače (pankreatitis, apsces, trauma, rak).

Kod ozljeda pljuvačnih žlijezda (rak žlijezda slinovnica, endemski parotitis, makroamilazemija) povećava se i aktivnost serumske a-amilaze, ali na račun S-izoenzima.

Obje a-amilazne izoenzime imaju malu molekularnu težinu (45.000), pa se filtriraju u bubrezima i izlučuju u urinu. Povećanje aktivnosti amilaze u mokraći (dijastaza) u akutnom pankreatitisu događa se 6 do 10 sati kasnije nego u krvnom serumu.

Na temelju biohimist.ru

Načelo metode. Alfa-amilaza katalizira hidrolizu supstrata netopljivog obojenog škroba kako bi se dobila plava boja topljiva u vodi. Količina oslobođene boje proporcionalna je aktivnosti enzima.

Tijek određivanja. Za određivanje aktivnosti alfa-amilaze u serumu ili urinu pripremaju se paralelni pokusni i kontrolni uzorci i analiziraju u sljedećem redoslijedu:

Uzorci su pomiješani, ostavljeni da stoje 15 minuta, centrifugirani na 3000 okretaja u minuti tijekom 5 minuta. Zatim izmjeriti optičku gustoću eksperimentalnog uzorka u odnosu na kontrolu na FEC na valnoj duljini od 590 nm u kivetama debljine sloja od 5,0 mm.

Aktivnost enzima nalazi se na kalibrirajućem rasporedu.

Klinička i dijagnostička vrijednost određivanja aktivnosti alfa-amilaze u serumu i mokraći: kod ljudi se alfa-amilaza izlučuje u gušteraču i žlijezdama slinovnica, njezina mala aktivnost se nalazi u tkivu jetre i skeletnim mišićima. Molekularna težina enzima je relativno niska ("48,000"), pa se filtrira u glomerulima bubrega i sadrži urin.

U zdravih ljudi aktivnost serumskih enzima je od 140 do 350 U / l, u urinu od 1000 do 2000 U / l. Aktivnost amilaze povećava se uglavnom kod bolesti gušterače (kod akutnog pankreatitisa). Bolesti žlijezda slinovnica i kronične bolesti bubrega dovode do povećanja aktivnosti serumske alfa-amilaze.

Rad broj 5. Učinak adrenalina na glukozu u krvi.

Napredak u radu. U zeca, iz rubne vene uha ili u štakora iz kaudalne vene, prikuplja se 0,1 ml krvi i određuje se glukoza u krvi metodom o-toluidina.

Zatim, životinja ima ošišanu kosu, trljajući kožu s alkoholom i 0,1% otopinom adrenalina uzima se potkožno u količini od 0,1 ml po 1 kg težine, a nakon 30 minuta ponovno se mjeri glukoza u krvi.

Rad broj 6. Učinak inzulina na glukozu u krvi.

Napredak u radu. Od drugog zeca iz rubne vene uha ili iz štakora iz kaudalne vene, uzmite 0,1 ml krvi i odredite sadržaj glukoze u krvi.

U životinji, odrežite krzno na svojoj strani, liječite ga alkoholom i ubrizgavajte potkožno inzulin u iznosu od 1,5 međunarodnih jedinica po kg mase. Sat kasnije ponovno odredite razinu glukoze u krvi. Životinji se supkutano uvede 5% otopina glukoze kako bi se spriječio šok inzulina: zec 10 ml, štakor - 1 ml.

Rezultati 3. i 4. rada prikazani su u tablici i donose zaključke.

Na temelju materijala www.ronl.ru

α-amilaza (diastaza, 1,4-a-D-glukan hidrolaza, EC 3.2.1.1.) katalizira hidrolizu α-1,4-glukozidnih veza škroba, glikogena i srodnih polisaharida u maltozu, dekstrinu i druge polimere. Molekularna masa enzima je oko 48.000 D. Molekula sadrži atom kalcija koji ne samo da aktivira enzim, već ga štiti od djelovanja proteaza, a aktivnost amilaze se povećava s utjecajem iona klora. U krvi je predstavljena s dva izoenzima: pankreasu - P-tip i S-tipom slinovnice, od kojih je svaki podijeljen u nekoliko frakcija. Izoenzim tipa S općenito je 45–70% (u prosjeku 57%), ostatak je u P-tipu. Oba izoenzima imaju gotovo identična katalitička i imunološka svojstva, neznatno se razlikuju u elektroforetskoj pokretljivosti, ali su dobro odvojena gel filtracijom na DEAE - Sephadexu. Tu je i makroamilaza, koja se ne izlučuje putem bubrega, ali se može naći u normalnom krvnom serumu (oko 1% zdravih ljudi) i patologiji (2,5%).

Visoka aktivnost amilaze opažena je u parotidnoj i pankreasnoj. Međutim, njegova aktivnost, iako mnogo niža, nalazi se u velikim i tankim crijevima, skeletnim mišićima, jetri, bubrezima, plućima, jajovodima, masnom tkivu. U krvi je enzim povezan s proteinima plazme i oblikovanim elementima. Aktivnost enzima jednaka je za muškarce i žene i ne ovisi o prirodi hrane koja se uzima i vremenu.

Postojeće metode proučavanja aktivnosti a-amilaze u biološkim tekućinama podijeljene su u dvije velike skupine:

1. Saharifikacija (reduktometrija), temeljena na proučavanju šećera nastalog iz škroba redukcijskim učinkom glukoze i maltoze.

2. Amiloklastika, na temelju određivanja ostatka neobrađenog škroba:

• prema stupnju intenziteta njegove reakcije s jodom. Ove metode su osjetljivije i specifičnije, ali njihova točnost uvelike ovisi o kvaliteti škroba i optimizaciji uvjeta određivanja.
• suspenzija viskoznosti škroba, nemaju visoku točnost i ne koriste se sada.

3. Metode s kromogenim supstratima - temelje se na uporabi kompleksa supstrata - boja, koji se pod djelovanjem α-amilaze razgrađuju kako bi se dobila vodotopiva boja.

4. Metode temeljene na spojenim enzimskim reakcijama:

Škrob + H₂O Maltose + Maltotriose + dekstrin

Maltoza + N₂Oko 2 glukoze

Glukoza + ATP glukoza - 6 - F + ATP

Glukoza-6-F + NADF glukonat-6-F + NADFN

Aktivnost enzima određena je brzinom nakupljanja NADPH.

Dvije amiloklastične metode odobrene su kao jedinstvene: Karavey (sa otpornim supstratom škroba) i Smith-Rohe.

α-amilaza katalizira hidrolizu netopljivog supstrata obojenog škroba kako bi se dobila plava boja topljiva u vodi. Količina oslobođene boje proporcionalna je katalitičkoj aktivnosti enzima.